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紫外可見分光光度計等光譜儀器定量分析中,一般在分析樣品前都需要采用標準物質(zhì)對儀器進行校正,即建立儀器響應(yīng)信號與被分析物質(zhì)濃度的關(guān)系。根據(jù)儀器校正操作方式的不同,常用的校正方法有三種:工作曲線法、標準加入法和內(nèi)標法。具體在進行定量分析時,選擇哪一種校正方法,應(yīng)考慮儀器方法特點、待測試樣基質(zhì)中存在的干擾程度等因素,才能得到準確可靠的數(shù)據(jù)。
(1)工作曲線法 工作曲線法又稱為外標法。它是首先用一系列已知濃度的標試樣校正儀器,即依次測量各標準試樣的儀器響應(yīng)值,以各標準試樣得到的響應(yīng)與其中分析物濃度建立一定的關(guān)系曲線。然后在棚同的條件下,測定待測試樣的響應(yīng)值,根據(jù)標準試樣響應(yīng)值與濃度關(guān)系計算待測試樣的濃度。通常情況下,工作曲線在線性范圍內(nèi),分析物在儀器上的響應(yīng)與其濃度有線性關(guān)系。對于非線性工作曲線需要大量的校正數(shù)據(jù),以準確地確定儀-器的響應(yīng)和濃度之間的關(guān)系。工作曲線法采用zui小二乘法進行處理,直接計算試樣的濃度。該方法適用范圍廣,是儀器分析中zui基本的定量方法。為了提高測定的準確度,繪制工作曲線的條件應(yīng)與測定試樣的條件盡量保持一致,否則不宜用此法。
(2)標準加入法 標準加入法又稱增量法。該方法是將已知量的標準試樣加入到一定量的待測試樣中即制備加標試樣,通過測定不同加標量的加標試樣的儀器響應(yīng)值(或其函數(shù))后,進行定量分析待測試樣含量的方法。
標準加入法如只進行一次加標,根據(jù)未加標標準試樣與加標試樣的儀器響應(yīng)值,可用一定的關(guān)系式進行計算獲得待測試樣含量。也可通過多個不同添加量加標(其它*一樣),以加標試樣的儀器響應(yīng)值對標準試樣添加量繪制工作曲線。根據(jù)曲線外推在橫坐標上的截距值為待測試樣含量。
(3)內(nèi)標法 內(nèi)標法是在試樣和各含量不同的一系列標準試樣中,分別加入固定量的待測物質(zhì)以外的純物質(zhì),即內(nèi)標物。同時測得加入內(nèi)標的標準試樣中锎吁物和內(nèi)標物對應(yīng)的響應(yīng),以分析物和內(nèi)標物的響應(yīng)比對分析物濃度作圖,即可得到相應(yīng)的內(nèi)標法校正曲線。zui后用測得的試樣與內(nèi)標物的響應(yīng)比在校正曲線上獲得對應(yīng)于試樣的濃度。內(nèi)標法實際上是外標法的一種改進。
對于儀器精密度相對較差或影響響應(yīng)參數(shù)較多的儀器,采用內(nèi)標法可減少儀器波動對結(jié)果的影響,從而獲得更的分析結(jié)果。使用內(nèi)標法時,應(yīng)正確選擇內(nèi)標物及濃度。一般內(nèi)標物在物理和化學性質(zhì)上要類似于分析物,內(nèi)標物信號既不能干擾分析物,又不能被試樣中其它組分干擾,并且易于測量。內(nèi)標物的濃度與分析物的濃度應(yīng)控制在同一數(shù)量級上。